Absolvoval Právnickou fakultu Masarykovy univerzity V Brně. Po advokátních zkouškách si Aleš Dufek otevřel vlastní AK.
V letech 2002 až 2009 byl Aleš Dufek předsedou Matice svatohostýnské, tedy spolku pečujícího o zvelebení a údržbu Svatého Hostýna, nejvýznamnějšího mariánského poutního místa Moravy.
Do komunální politiky Aleš Dufek poprvé kandidoval v roce 1994, a to do Zastupitelstva města Zlína. Dostal se do něj až po šestnácti letech, tedy ve volbách 2010 jako nestraník za hnutí STAN. Záhy se stal náměstkem zlínského primátora (od 2010 do 2014 a poté opět v letech 2018 až 2021, kdy na post rezignoval, když získal pkřeslo ve Sněmovně).
V letech 2013 až 2017 byl Aleš Dufek členem hnutí Zlín 21, krátce i jeho předsedou. V té době neúspěšně kandidoval do Senátu v obvodu č. 78 - Zlín. Nepostoupil ani do druhého kola.
Ve volbách 2016 se Aleš Dufek (od roku 2017 člen KDU-ČSL) dostal do Zastupitelstva Zlínského kraje. Ve volbách 2020 mandát neobhájil.
Do dolní komory se Aleš Dufek probojoval v parlamentních volbách 2021 za koalici SPOLU (ODS, KDU-ČSL a TOP 09). Díky 8 163 preferenčním hlasům se z šesté příčky zlínské kandidátky posunul na čtvrtou a získal poslanecký mandát.
Aleš Dufek je ženatý a má tři děti.