Hereckou kariéru Samuel L. Jacson zahájil v 70. letech 20. století. Průlomovou roli dostal až v roce 1994, kdy ztvárnil Julese Winnfielda ve filmu Quentina Tarantina Pulp Fiction: Historky z podsvětí, za niž byl nominován na Oscara a na Zlatý glóbus. Nominací na něj získal několik.
Objevil se ve filmech různých žánrů, včetně akčních, dramatických, sci-fi a superhrdinských. Samuel L. Jacson spolupracoval s řadou uznávaných režisérů, jako jsou např. Steven Spielberg, Spike Lee, Martin Scorsese nebo M. Night Shyamalan.
Od Quentina Tarantina Samuel L. Jacson dostal kromě snímku Pulp Fiction: Historky z podsvětí role v Nespoutaném Djangovi či v Osmi hrozných.
V Marvel Cinematic Universe (MCU) Samuel L. Jacson ztvárnil postavu Nicka Furyho a objevil se v mnoha filmech a televizních pořadech MCU.
Samuel L. Jacson je držitelem Guinnessova rekordu jako nejvýdělečnější herec všech dob, a to díky svým rolím v kasovních trhácích, jako jsou MCU, Star Wars a Jurský park.
Kromě své filmové kariéry, na svém kontě má více než 150 titulů, Samuel L. Jacson také hojně působil v divadle, a to jak na Broadwayi, tak v regionálních produkcích. V roce 2022 dostal Čestného Oscara.
Samuel L. Jacson je zastáncem občanských práv a angažuje se v různých charitativních kauzách, včetně organizací zaměřených na vzdělávání a podporu znevýhodněných komunit.
V roce 1980 se manželkou Samuela L. Jacsona stala herečka Latanya Richardson. Jejich dcera Zoe (narozena 1982) je producentkou.